二手熒光定量PCR儀是一種可以實(shí)時(shí)檢測核酸擴增的技術(shù)，在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的變化對PCR過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監控，以此實(shí)現對初始模板的定量分析。無(wú)需參比染料，無(wú)需定期校準，采用歸一化算法，快速準確直觀(guān)的呈現實(shí)驗結果，用戶(hù)使用方便簡(jiǎn)潔。我們在做熒光定量PCR時(shí)提到的三個(gè)名稱(chēng)：擴增曲線(xiàn)，標準曲線(xiàn)，熔解曲線(xiàn)。
?。?）擴增曲線(xiàn)：擴增曲線(xiàn)有兩種展現形式，一種是線(xiàn)性，一種是對數形式。我們通常是用CT來(lái)推算樣品中樣品的濃度。CT值越高說(shuō)明模板濃度越低。上面也詳細說(shuō)明了原理，在這里就不過(guò)多贅述。
?。?）標準曲線(xiàn)：將已知濃度的樣品（標準品）經(jīng)過(guò)梯度稀釋后分別取樣進(jìn)行熒光定量PCR，得到的一系列的Ct值，用這個(gè)Ct值與Log模板數對應可以得到一個(gè)相關(guān)的曲線(xiàn)，我們叫標準曲線(xiàn)?？梢杂眠@個(gè)標準曲線(xiàn)中的一些參數來(lái)判斷這個(gè)熒光定量PCR體系的優(yōu)劣。
?。?）熔解曲線(xiàn)：Tm值，MeltingTemperature（解鏈溫度），PCR雙鏈產(chǎn)物的退火溫度。這兩個(gè)圖是在熒光定量PCR結束后，對產(chǎn)物進(jìn)行逐步升溫時(shí)進(jìn)行的監測，可以看到在達到其解鏈溫度時(shí)，熒光信號會(huì )有一個(gè)忽然的下降。我們將測得的這個(gè)曲線(xiàn)叫做熔解曲線(xiàn)。理論上如果PCR得到特異性產(chǎn)物則只有一個(gè)Tm值，在溶解曲線(xiàn)上表示只有單峰存在。如果是多相峰，那么可以判斷產(chǎn)物不是單一的，發(fā)生了非特異擴增。
