二手蛋白純化儀是利用顆粒不同程度的顆粒吸附力來(lái)使分離的目的達到蛋白質(zhì)的選擇吸附分離。設備采用低溫有機溶劑沉淀法，使用如甲醇，乙醇等與水可混溶的有機溶劑，降低多數蛋白質(zhì)的溶解度并且將其析出，和鹽析相比較，這種方法的分辨率更加的高，然而蛋白質(zhì)比較容易變形，需要在低溫下進(jìn)行。
1.如果凝膠過(guò)濾的介質(zhì)是干粉，則需在凝膠過(guò)濾緩沖液中*溶脹。
2.在遠離過(guò)往通道及直接光照的恒溫環(huán)境，將層折柱垂直安裝在穩固的實(shí)驗室支架上。
3.用一注射器將凝膠過(guò)濾緩沖液從柱子的輸出管注入柱子，至緩沖液達到柱子支持體平面之上，注射器留在輸出端以堵住柱子。
4.沿著(zhù)一根順柱子內壁而放的玻璃棒將凝膠混懸物倒入柱子至所設高度，再小心往凝膠頂部加入1cm高的一層緩沖液，并連接緩沖液貯存容器，取去堵著(zhù)柱子輸出管的注射器，用2~3倍柱床體積的緩沖液請洗柱子。
5.流盡柱子凝膠頂部上面的緩沖液、關(guān)閉其輸出管。
6.加入相當于柱床體積1%~5%的蛋白質(zhì)樣品。開(kāi)放輸出管，讓樣品流進(jìn)柱床，凝膠上面的柱子內壁以緩沖液沖洗。
7.在凝膠頂上用吸管加入1cm高的緩沖液層，重新與緩沖液貯存容器連接，開(kāi)始洗脫。
8.分部收集流出液。每分部相當于1%總柱床體積，分別測每個(gè)分部的A280，并各取小份樣品測生物活性，選出有活性的分部用SDS-PAGE檢測所含蛋白質(zhì)的數量和質(zhì)量，合并含目標蛋白的分部。
9.用2~3個(gè)柱床體積的凝膠過(guò)濾緩沖液洗柱，柱子保存在含0.02%疊氮鈉的緩沖液中，柱于可無(wú)限次地使用。
